維生素D是人類必需的一種脂溶性維生素，核心功能在于調節(jié)鈣磷代謝，對維持骨骼、神經和肌肉系統(tǒng)的正常運作至關重要。此外，它還參與組織細胞的分化、增殖以及免疫調節(jié)過程。
  臨床常用的維生素D及其結構類似物包括：維生素D2、維生素D3、骨化二醇、骨化三醇、阿法骨化醇、帕立骨化醇、卡泊三醇等。
  維生素D結構類似物的生物分析面臨顯著挑戰(zhàn)。部分原因是某些類似物（如骨化三醇）是內源性物質，在人體血漿中天然存在，但其濃度極低（pg級）。如此微量的目標物，加之其他維生素D代謝物可能造成的干擾，使得準確測定這些化合物變得十分困難。
  分析方法的難點
  1)靈敏度挑戰(zhàn)
  前處理復雜：為達到極低定量下限（pg級），常需較大血漿樣本量（0.3~0.5 mL）。目標化合物的強脂溶性導致僅靠簡單蛋白沉淀難以有效純化，會產生嚴重基質效應。需采用液液萃取（LLE）、固相萃取（SPE）、蛋白沉淀后吹干再衍生化或其組合等前處理策略。
  離子化效率低：強脂溶性導致其在極性溶劑中溶解性差，難以形成穩(wěn)定的電噴霧（ESI）帶電液滴。其化學結構缺乏強質子化位點，在ESI正離子模式下難以高效生成穩(wěn)定的[M+H]?離子，而更易形成穩(wěn)定性較差的[M+NH?]?加合物，造成質譜信號波動，嚴重影響靈敏度和重現(xiàn)性。
  基質抑制顯著：強脂溶性使其易受血漿中共萃取的磷脂干擾，產生強烈的離子抑制效應。這不僅大幅降低目標分析物信號（直接影響靈敏度），還可能損害方法的線性范圍、準確度和精密度。
  2)內源性干擾
  內源性維生素D代謝物（如維生素D?及其代謝物）與目標維生素D類似物（如帕立骨化醇）結構式、分子量都非常接近，從而在色譜柱上保留行為高度相似，極易發(fā)生共洗脫，很難分離，嚴重影響目標化合物定量的特異性和準確性。
  3)空白基質難題
  多數維生素D類似物屬內源性物質，無法使用常規(guī)空白人血漿配制標準曲線，需使用合適的替代基質。方法驗證時需同時包含替代基質和真實基質的質控樣品（QC），并必須進行平行性實驗。只有平行性實驗通過，才證明替代基質適用于定量分析。
  4)穩(wěn)定性問題
  維生素D類似物普遍存在顯著的光不穩(wěn)定問題。因此，從全血采集、樣品前處理、儲存到最終分析的所有環(huán)節(jié)，均須嚴格避光操作（如使用棕色容器、在黃光環(huán)境下操作），以確保分析物的穩(wěn)定性。
  方法基本信息
  實驗室采用蛋白沉淀或液液萃取前處理方式，找到最佳的流動相及色譜柱實現(xiàn)基質干擾分離，已成功開發(fā)出該類物質的LC-MSMS檢測方法，測定人血漿或血清中維生素D3及其多個類似物，可以快速高效的完成臨床生物樣品分析檢測，助力藥物BE研究及臨床PK或其他檢測研究。其中維生素D3定量下限為0.5 ng/mL，帕立骨化醇、卡泊三醇、艾地骨化醇的定量下限分別為為10、20和10 pg/mL。定量下限的典型圖譜如下：
  維生素D3（定量下限：0.5 ng/mL）
  T(min)
  帕立骨化醇（定量下限：10 pg/mL）
  T(min)
  卡泊三醇（定量下限：20 pg/mL）
  T(min)
  艾地骨化醇（定量下限：10 pg/mL）
  T(min)
  研究經驗
  維生素D3的方法已經成功用于阿侖膦酸鈉維D3片人體BE研究并完成檢測，帕立骨化醇的方法成功運用于帕立骨化醇軟膠囊人體BE研究，卡泊三醇的方法成功運用于卡泊三醇倍他米松軟膏人體PK研究并完成申報資料提交。
  作為國內首批運用電子化管理的檢測單位，湖南科銳斯醫(yī)藥科技有限公司自2020年起在項目管理、物資管理、原始記錄、檔案管理等全面運用電子化平臺開展生物樣本檢測研究。公司擁有生物樣本分析檢測、外用制劑體外評價、制劑微觀結構解析及輔料反向等系列平臺，目前已完成近500個品種的生物樣本檢測，申報項目300+項，接受國家局現(xiàn)場核查近40次且0缺陷通過，70+個品種免核查。
  公司于2022年取得中國合格評定國家認可委員會（CNAS）實驗室認可證書，2024年建立了滿足中美雙報的中英文體系。
  特色品種
  內源性物質：熊去氧膽酸、維生素D3及類似物
  外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、氟比洛芬凝膠貼膏等
  復方制劑：復方甘草酸苷等
  體外磷結合劑：枸櫞酸鐵等
  參考文獻
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